برد پارکر آگار توسط پارکر و همکارانش در سال 1962 از فرمول تلوریت – گلیسین Zebovitz به دست آمد. برد پارکر آگار محیط کشتی است که برای شمارش و جداسازی استافیلوکوک‌ها در مواد غذایی و سایر مواد استفاده می‌شود. کاربرد این محیط به این دلیل است که تمایز مناسب گونه‌های مثبت کوآگولاز را محیا می‌کند. باعث می‌شود گونه‌های مثبت همبستگی بالایی بین آزمایش کوآگولاز و وجود منطقه‌ای واضح در لیپولیز را به وجود آورند. امولسیون زرده تخم‌مرغ به‌عنوان عامل تمایز و سدیم پیروات به‌عنوان محرک رشد انتخابی اضافه شد.
محیط کشت برد پارکر آگار چیست
محیط کشت برد پارکر آگار ترکیبی از مواد آلی و معدنی است که اجزای اصلی تشکیل دهنده این محیط عبارتند از عصاره گوشت، کازئین، عصاره مخمر، سدیم پیروات، گلایسین، لیتیوم کلرید و آب و آگار می‌باشد. برد پارکر آگار محیط کشت انتخابی است و برای شناسایی و جداسازی باکتری های استافیلوکوکوس ارئوس در مواد غذایی مختلف استفاده می‌شود. انتخابی بودن این محیط کشت به دلیل وجود گلایسین، لیتیوم کلرید و پتاسیم کلرید است.
سدیم پیروات از اجزای اساسی جهت بازیابی باکتری‌های استافیلوکوکوس آسیب دیده و رشد آن‌ها محسوب می‌شود. در محیط‌های کشت از جمله محیط برد پارکر آگار، به منظور جامد کردن محیط کشت آگار به کار می‌رود. محیط برد پارکر آگاررشد استافیلوکوکوس را ممکن می‌سازد و به صورت انتخابی رشد اکثر باکتری‌ها را مهار می‌کند. اکثر استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت به طور تقریبی می‌توانند تلوریت را کاهش دهند و کلنی‌های سیاه تولید کنند. این در حالیست که سایر استافیلوکوک‌ها نمی‌توانند این کار را انجام دهند و بنابراین این محیط به‌عنوان یک محیط انتخابی و تشخیصی جهت جداسازی و شمردن استافیلوکوک‌های مثبت در غذا است.
خرید برد پارکر آگار
شرکت تارا طب با بیش از ده سال سابقه فعالیت در زمینه واردات و تامین مواد اولیه، مفتخر است مواد و تجهیزات مورد نیاز شما از بهترین برندهای روز دنیا را با نازلترین قیمت بازار در اختیارتان قرار دهد. شما می‌توانید جهت کسب اطلاعات بیشتر، استعلام قیمت و خرید از طریق راه‌های ارتباطی موجود در قسمت تماس با ما اقدام بفرمایید.
ترکیبات برد پارکر آگار
محیط کشت برد پارکر آگار از ترکیب موادی مانند تریپتون، پپتون HM، عصاره مخمر، گلایسین، سدیم پیروات، لیتیوم کلرید، پتاسیم تلوریت و آگار ساخته شده است. همان‌طور که گفته شد سدیم پیروات به‌عنوان محرک رشد انتخابی و امولسیون زرده تخم‌مرغ به‌عنوان عامل تمایز اضافه می‌شود. سدیم پیروات نه‌تنها از سلول‌های آسیب‌دیده محافظت و به بهبود آن‌ها کمک می‌کند، بلکه بدون ازبین‌بردن گزینش‌پذیری رشد استافیلوکوکوس اورئوس را تحریک می‌کند.
سدیم پیروات و گلایسین به‌عنوان فاکتورهای رشد استافیلوکوک‌ها عمل می‌کنند. پروکسیدهای سمی ایجاد شده در محیط کشت توسط پیروات خنثی می‌شوند. از رشد گونه‌های کلی فرم‌ها توسط پتاسیم تلوریت جلوگیری می‌شود. همچنین تلوریتی که توسط استافیلوکوکوس اورئوس ایجاد شده را کاهش می‌دهد که اغلب کلنی‌های سیاه رنگ ایجاد می‌کند. کاهش تلوریت به علت عدم وجود امولسیون زرده تخم مرغ ضروری است. این امر سبب تولید کلنی‌های سفید تا خاکستری استافیلوکوک و آگار شفاف می‌شود. با اضافه‌کردن زرده تخم‌مرغ، رنگ محیط زرد و مات می‌شود. افزودن زرده تخم‌مرغ علاوه بر غنی‌سازی، به فرایند شناسایی از طریق نشان‌دادن فعالیت لیستیناز کمک می‌کند.
HM پپتون B، تریپتون و عصاره مخمر منابع کربن، نیتروژن، گوگرد و ویتامین‌ها هستند. گلیسین، پیروات رشد استافیلوکوک را بالا می‌برد. تلوریت پتاسیم و کلرید لیتیوم اغلب میکروفلورهای آلوده‌کننده به جزء استافیلوکوکوس اورئوس را مهار می‌کنند. کلنی‌های خاکستری سیاه و یک منطقه شفاف روی این محیط برای استافیلوکوک کواگولاز مثبت تشخیصی است. یک ناحیه مات در اطراف کلنی‌ها با انکوباسیون بیشتر ایجاد می‌شود که این امر می‌تواند به دلیل فعالیت لیپولیتیک باشد.
آماده سازی محیط کشت
58 گرم از محیط کشت برد پارکر آگار را درون 950 میلی‌لیتر آب مقطر حل کنید. سپس حرارت دهید تا پودر محیط کامل در آب حل شود. بعد از آن به مدت 15 دقیقه در دمای 121 درجه اتوکلاو کنید. پس از انجام اتوکلاو محیط را تا دمای 45-50n درجه خنک کنید و میزان 50 میلی‌لیتر محلول زرده تخم‌مرغ – تلوریت به آن بیفزایید. به‌آرامی محلول محیط کشت را تکان دهید تا مخلوط شود و در پلیت پخش کنید.
فرایند آزمایش برد پارکر آگار
قبل از تلقیح سطح پلیت محیط کشت را در کمترین زمان ممکن خشک نمایید. نمونه غذایی موردنظر را در آب یا محیط کشت buffered peptone water خیس نمایید و طبق پروتکل مربوطه از آن رقت به دست آورید. بر روی پلیت مقدار 0/1 تا 0/5 میلی‌لیتر از نمونه را تلقیح کرده و به‌صورت کامل در سطح پلیت پخش کنید. سپس پلیت‌های تلقیح شده را در دمای 35 درجه (۲ درجه کمتر یا بیشتر) به مدت 24-48 ساعت گرماگذاری نمایید.
مراحل کنترل کیفی برد پارکر آگار
- ظاهر محیط آماده به رنگ زرد و مات است.
- ظاهر محیط دهیدراته به‌صورت پودری، یکنواخت و کرم رنگ است.
تفسیر نتیجه کشت
به‌وجودآمدن کلنی‌های سیاه، براق و محدب به قطر 1-1.5 میلی‌متر بیانگر آزمایش مثبت احتمالی جهت حضور استافیلوکوکوس اورئوس است. کلنی‌هایی که رنگ‌دانه سیاه ایجاد نمی‌کنند منفی تفسیر می‌شوند. رشد ارگانیسم‌ها به‌صورت استافیلوکوکوس اورئوس خاکستری مایل به سیاه براق ایجاد می‌کند. استافیلوکوک‌های کوآگولاز منفی اغلب در این محیط کشت‌ها رشد نمی‌کنند و در صورت رشد نیز فاقد هاله شفاف می‌باشند. در محیط کشت برد پارکر آگار سایر باکتری‌ها نیز رشد نمی‌کنند و در صورت رشد کلنی‌های سفید یا قهوه‌ای رنگ تشکیل می‌دهند که فاقد هاله شفاف هستند.
منطقه منفی برای لسیتیناز micrococcus luteus سایه قهوه‌ای -مشکی، مثبت و مات در اطراف proteus mirabilis قهوه‌ای-مشکی، منفی برای لیستیناز استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس سیاه، منفی برای لسیتیناز bacillus subtilis مات قهوه ای تیره، منفی برای لسیتیناز اشرشیاکلی قهوه‌ای مایل به سیاه بزرگ، منفی برای لسیتیناز استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس نامنظم می‌باشد و امکان دارد پاکسازی کند. ممکن است مناطق مات گسترده در طی ۲۴ ساعت به وجود آیند.
نکته
تمامی کلنی‌هایی که مشکوک به استافیلوکوکوس اورئوس هستند با وجود واکنش‌های منفی از محیط کشت جدا کنید و با تست‌های تأییدی بیشتر مورد بررسی قرار دهید. برخی باکتری‌های غیر هدف که کلنی‌های آن‌ها در نمونه وجود دارند و نزدیک کلنی‌های کوآگولاز مثبت رشد می‌کنند. امکان دارد کمی تا قسمتی از واکنش کوآگولاز را هضم نمایند.
توضیح بیشتر
این فرمول در USP و توسط AOAC international به تصویب رسید. در عملکرد آزمایش‌های میکروبی استفاده از محیط کشت برد پارکر آگار پیشنهاد می‌شود. کمیته ISO نیز به‌تازگی این محیط را برای شمارش و جداسازی استافیلوکوک‌ها پیشنهاد داده است. همچنین با افزودن پلاسمای فیبرینوژن به این محیط می‌توان فعالیت کوآگولاز را نیز تشخیص داد. محیط کشت برد پارکر آگار بر اساس ISO6888 جهت اهداف تشخیصی بیماری‌ها و سایر امور مربوط به انسان به کار نمی‌رود. این نوع محیط کشت به دلیل وجود لیتیوم کلرید و پتاسیم تلوریت محیطی بسیار انتخابی است.
در برد پارکر آگار گرم مثبت بنفش است یا صورتی
اگر در کشت برد پارکر آگار باکتری‌ها بنفش باقی بمانند، گرم مثبت هستند. همچنین اگر در این کشت باکتری‌ها صورتی یا قرمز شوند، گرم منفی هستند. انواع مختلفی از بیماری‌ها را این دودسته ایجاد می‌کنند. عفونت‌های گرم مثبت شامل استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی سیلین (MRSA)، شوک سمی و عفونت‌های استرپتوکوکی است.
احتیاط هنگام کار با برد پارکر آگار
محیط کشت برد پارکر آگار به دلیل وجود لیتیوم کلرید بسیار سمی است. از تماس این محیط با چشم، پوست و استشمام پودر خودداری کنید.
بسته‌بندی و شرایط نگهداری برد پارکر آگار
پودر محیط کشت برد پارکر آگار درون قوطی کاملاً دربسته است. این محیط در دمای پایین‌تر از 30 و محیط آماده نیز در دمای 2-8 درجه نگهداری شود. بهترین زمان استفاده از آن تا قبل از انقضای درج شده بر روی محصول است. شما می توانید جهت کسب اطلاعات بیشتر، استعلام قیمت و خرید از طریق راه‌های ارتباطی موجود در قسمت تماس با ما، با مشاوین فروش شرکت به صورت مستقیم در ارتباط باشید. شرکت تارا مدرن طب تجهیز نیازهای شما را در سریعترین زمان ممکن، با نازلترین قیمت بازار فراهم می‌کند.